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客戶文章技術(shù)專題問題答疑
互作實驗蛋白實驗分子細胞實驗
PCR擴增不出是引物有問題嗎?

基本不是。當今發(fā)展出各色各樣的PCR擴增技術(shù),各色各樣的高溫聚合酶,就是來解決PCR擴增中遇到的擴不出,擴增效率低的問題。如槽式PCR就是擴增那些拷貝數(shù)很低的基因片段。 有些重復(fù)片段的擴增, GC含量高的片段,非要采用特殊擴增手段才能擴增出了。


引物擴增不出,主要是下列兩種情況比較常見:
RT-PCR:注意,很多基因通過常規(guī)RT–PCR方法是很難不增出來的。RT- PCR成功的關(guān)鍵在于RT的反應(yīng)的RNA質(zhì)量和目標基因在特定組織和細胞中含量。
從基因組中擴增:一般情況下,基因在基因組中都是單拷貝,基因組作為模板需要嚴格控制用量?;蚪MDNA過高,會影響反應(yīng)體系中的Mg和pH。

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